腺相关病毒载体构建服务

服务项目简介

腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV）是简单的非致病性单链DNA病毒，需要辅助病毒参与生活周期，辅助病毒通常为腺病毒（Ad）或者单纯疱疹病毒（HSV）。基因组两端为末端反向重复序列（ITR），中间基因组编码两个蛋白：Cap和Rep。ITRs对于病毒的复制和包装具有决定性作用。Cap蛋白为病毒衣壳蛋白，Rep蛋白参与病毒的复制和整合。AAV能感染多种细胞。Rep蛋白存在时，病毒基因组很容易整合到人类弟19号染色体的te异位点：AAVS1位点。这是已知的能够定点整合的哺乳动物DNA病毒。

重组腺相关病毒载体（rAAV）源于非致病的野生型腺相关病毒，由于其安性好、宿主细胞范围广（分裂和非分裂细胞）、免疫源性低，在体内表达外源基因时间长等特点，被视为有前途的基因转移载体之一，在世界范围内的基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用。经过十几年的研究，重组腺相关病毒的生物学特性已被深入了解，尤其是其在各种细胞、组织和体内实验中的应用效果方面已经积累了许多资料。在医学研究中，rAAV被用于多种疾病的基因治疗的研究（包括体内、体外实验）；同时作为一种有特点的基因转移载体，还广泛用于基因功能研究、构建疾病模型、制备基因敲除鼠等方面。目前已发现的AAV至少有十几种血清型，它们主要区别在衣壳蛋白Cap的不同，因此导致各种血清型AAV对不同的组织和细胞的不同感染效率。

AAV选择的条件

1. 治疗基因的长度不能过大。AAV的总容量4.7kb，还要包括AAV自身的ITR，启动区和RNA加尾信号；

2. 基因需要持续表达，蛋白可以是分泌型，也可以是非分泌型；

3. 长期表达目的基因，没毒副作用；

4. 不需要目的基因立刻表达；

5. 不需要基因高水平表达；

6. AAV载体对靶细胞具有较高的转导效率。

AAV病毒的感染细胞

AAV载体对于骨骼肌、视网膜、肝细胞、心脏平滑肌细胞、神经元细胞、胰岛B细胞、关节滑膜细胞等具有良好的感染效果，而对于淋巴细胞、造血干细胞、神经胶质细胞、成纤维细胞等感染效果较差。

病毒的加样量

病毒量为105-106V.P/Cell时佳。如果太低，基本检测不出，低加病毒量为104V.P/Cell，才能检出目的蛋白的表达。

病毒要求

本公司向客户提供三种rAAV载体--rAAV2、rAAV2/1载体的构建、扩增及纯化服务，包括了从实验设计到载体包装、生产、纯化、质量检定、分装等的一系列服务。为基础研究、临床前研究和早期临床研究提供高滴度、高纯度的rAAV载体。其中的对照病毒为携带GFP、LacZ和Luc标记。

除了AAV2和AAV2/1之外，我们也提供AAV1、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9等。具体情况请电话咨询本公司技术支持。

重组基因的启动子：mCMV、hCMV、PGK、CAG、HRE-miniCMV、hEF1α、AFP（大鼠）等。其中，CAG启动子为肝脏te异启动子。

病毒级别

实验室级别：适用于细胞实验、动物试验研究；
临床试验用级别：适用于药物开发、临床前研究、临床样品申报、临床试验等。

合同完成周期：

在完成载体构建的前提下，合同时间签订为80个工作日左右；