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服务流程:
1、联系我们,讨论服务内容
2、确定服务内容及服务时间
3、签定保密协议和业务合同
4、实施合同,定期向客户反馈
5、整理递交数据、结果和资料
6、完成合同,协商进一步合作

免疫共沉淀服务(Co-IP)

服务项目简介

免疫共沉淀(Co- Immunoprecipitation, Co-IP)是利用抗原和抗体的te异性结合以及细菌的Protein A或Gte异性地结合到免疫

球蛋白的Fc片段的现象开发出来的方法。其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体te异结合的

结合 于Agarose珠上的Protein A或G,若细胞中有与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“目的蛋白—兴趣蛋

白—抗兴趣蛋白抗体—Protein A或G”,经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,复合物又被分开。然后经免疫印迹或质谱检测目的蛋白。这

种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的,符合 体内实际情况,得到的结果可信度高。

免疫共沉淀服务(Co-IP)

技术步骤

(1)转染后24~48 h 收获细胞,加入适量细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解30 min, 细胞裂解液于4 °C, 大转

速离心30 min后取上清;

(2)取少量裂解液以备免疫印迹分析,剩余裂解液中加入适量的相应抗体,4 °C缓慢摇晃孵育过夜;

(3)取10μL protein A 或G琼脂糖珠,用适量裂解缓冲液洗3次,每次3,000 rpm离心3 min;

(4)将预处理过的10 μl protein A 或G琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4 °C缓慢摇晃孵育2~4 h,使抗体与

protein A或G琼脂糖珠偶联;

(5)免疫沉淀反应后,在4 °C 以3,000 rpm 速度离心3 min,将琼脂糖珠离心至管底;将上清小心吸去,琼脂糖珠用1mL裂解缓

冲液洗3-4次;后加入15 μL的3×SDS 上样缓冲液,沸水煮5分钟;

(6)SDS-PAGE, 免疫印迹或质谱仪分析。

应用领域

研究细胞内蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术。

服务周期

接到样本后1个月左右。

客户须知(对材料的要求、注意事项)

(1)细胞裂解采用温和的裂解条件,不能破坏细胞内存在的ALL蛋白质-蛋白质相互作用,多采用非离子变性剂(NP-40或Triton

X-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的,通过经验确定。不能用高浓度的变性剂(0.2% SDS),细胞裂解液中要加各种酶抑制剂

,如商品化的cocktail。

(2)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;

(3)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有弟三者在中间起桥梁作用;

(4)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择后检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,方法本身具有一定风险。

服务咨询及技术支持

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