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DNA ladder检测服务
服务项目简介
细胞核染色质DNA断裂是细胞凋亡的标志特征。在细胞发生凋亡时，核酸内切酶被激活，选择性降解染色质DNA，形成50-300 kb的大片段，并进而在核小体连接处断裂，形成180-200 bp或其整倍数的DNA片段，这些DNA片段可从细胞中提取出来，通过琼脂糖凝胶电泳，溴化乙啶染色呈现为梯状条带（DNA Ladder），并据此判断细胞凋亡产生。
技术步骤
1. 离心收集105~106细胞（1500×g，5min）于1.5mL微量离心管中；用PBS洗涤细胞两次（离心1500×g，5min），弃上清；
2. 沉淀的细胞中加入100 μL Lysis Buffer，涡旋振荡器上剧烈混合10秒，离心1000×g，5min，移上清于另一1.5mL微量离心管中；
3. 沉淀再加入100μL Lysis Buffer重复上步，合并两次的上清液；
4. 在上述合并的上清液中加入20μL Solution A，再加入20μL Enzyme A，55℃反应1小时；
5. 加入20μL Enzyme B，37℃，1小时；
6. 加入130μL Precipitant和950μL冷乙醇， 混匀，置-20℃，1小时以上或过夜；
7. 4℃，12, 000~14, 000 rpm离心15~30min，小心地弃去上清，收集沉淀的DNA；
8. 加入0.5mL 70%的冷乙醇，洗DNA沉淀，再12, 000~14, 000 rpm离心20min；弃上清，DNA沉淀于室温干燥10 min后，加入10~15μL TE Buffer，充分搅拌溶解DNA；
9. 取上述10~15μL样品加入2~3μL Loading Buffer，1.5%琼脂糖凝胶电泳（凝胶和电泳缓冲液TBE均加入0.5μg/mL的溴化乙啶），5V/cm电泳1小时，紫外灯下观察并拍照。
应用实例
细胞凋亡检测
服务周期
我公司在正式接受实验委托1~2周左右完成实验并交付实验结果。
服务咨询及技术支持
电话:
Email: slby800@163.com
