DNA或RNA提取服务-世联博研(北京)科技有限公司

好使用新鲜的样品或取样后立即在液氮中冷冻保存的样品，避免反复冻融，因为会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。样品运输要求在低温下进行，一般采用保温性较好的容器，如泡沫塑料盒、保温瓶等，并且在容器中加入足够量的液氮或干冰，彻底封存好容器。要注意保存管的密封性，标记不易脱落，附上样品的描述和实验方案。RNA 样品保存在70%的乙醇和0.1 M醋酸钠中低温运输。

服务程序

1. 可在我公司网站内直接填写《DNA/RNA提取服务订单》发至我公司邮箱。

2. 可下载订单，填写完成后，用传真的形式发到我公司。

3. 可电话联系详谈有关具体要求和服务内容。

4. 签订《DNA/RNA提取服务合同》，预付实验总费用的50%作为实验预付款。

5. 寄送：委托单位的试验材料和试剂等均须采用te快专递形式邮寄，有低温要求的、固定要求的，按低温保存、固定防碎方法运输，以确保实验物品的安可靠。

6. 实验结束后，本公司将结果及时发给客户，同时根据客户要求处理相关材料：实验报告、抽提产物及电泳图片。

7. 客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

服务咨询及技术支持

·电话:

·Email:SLBY800@163.COM

RNA提取

TRIZOL法

样本来源：血液、组织、培养的细胞，粪便、口腔粘膜、唾液、石蜡包埋组织、血痕等。

每1 mg组织或1×106培养细胞预期的RNA产量：
1. 肝和脾，6~10 μg
2. 肾，3~4 μg
3. 骨骼肌和脑组织，1~1.5 μg
4. 胎盘，1~4 μg
5. 上皮细胞(1×106 cultured cells)，8~15 μg
6. 纤维母细胞(1×106 cultured cells)，5~7 μg

技术流程：
1. 匀浆化作用
2. 分离阶段
3. RNA的沉淀
4. RNA的洗脱
5. RNA的再溶解
6. RNA的保存

TRIzol法抽提总RNA流程：

组织100 mg
↓
加1 ml TRIzol
↓
匀浆（要彻底，后转至EP管）
（组织匀浆量>100 mg时分装1 ml/每EP管）
↓
颠倒混匀10下，室温5分钟（30 °C孵育）
↓
加氯仿1/5体积（0.2 ml）（必须按总体积的1/5）
↓
颠倒混匀15 s，室温2~5分钟（30 °C孵育）
↓
4 ℃，离心12000 g，15分钟
↓
转上层水相（约400 μl）于另一1.5 ml EP管中
↓
加等体积异丙醇（约400 -500 μl），混匀室温10分钟
↓
4 ℃，离心12000 g，10分钟（30 °C孵育）
↓
弃上清
↓
加冰预冷的75%乙醇（用DEPC水配）1ml
↓
4 ℃离心7500 g，5分钟
↓
弃上清，空气干燥5~10分钟（不能完干燥）
↓
溶于DEPC水中至20 μl（10 μl~20 μl）
（可在55~60 ℃水中，10分钟助溶）

DNA抽提

技术原理:

核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程，纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分，如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。按照RNA 分离操作方案在完移去水样层后，匀浆中的DNA 存在于中间层和苯酚层中也可以被分离出来。在沉淀和多次洗脱后，DNA 溶解在8 mM NaOH中。

用途：

从组织和培养细胞中抽提的DNA 可以用来做样品中DNA 含量的测定, 通过PCR扩增DNA。同时抽提的基因组DNA 可以用于对Northern analysis的结果进行标准化，因为DNA 变异程度比总RNA 或组织重量要小。

技术流程：
1. DNA 的沉淀
2. DNA 的洗脱
3. DNA 的再溶解
4. DNA的保存。

5. DNA的定量及预期的产量
每mg组织或1×106培养细胞预期的DNA产量：
1）肝和肾，3~4 μg
2）骨骼肌，脑组织，和胎盘，2~3 μg
3）培养的人，大鼠，小鼠细胞(1×106)，5~7 μg
4）纤维母细胞，5~7 μg

载体质粒(carrier vector)的抽提、纯化及检测

（一）试剂盒抽提法

技术原理：

DNA双链与硅化材料相互作用的原理是DNA分子中磷酸二酯键在较低pH 值和高盐浓度环境下脱水，使得暴露的磷酸基团吸附硅胶。双链的DNA分子一旦被硅胶吸附，则以天然状态或部分变性状态存在，不能用洗脱RNA或碳水化合物等生物大分子的溶剂（如70％乙醇）将其洗脱下来。但是，经过水溶性缓冲液（通常为TE或水）重新水化后，DNA 就能从层析柱上定量回收。

技术流程：
1. 大肠杆菌接种，活化菌株。
2. 菌株培养过夜。
3. 收集细胞。
5. 悬浮细菌沉淀。
6. DNA质粒抽提、纯化和过柱。
7. 洗脱质粒DNA。
8. 保存。

FAQ（Frequently Asked Questions）

1.提取的RNA降解，原因有哪些？怎样避免？

RNA酶是RNA降解的主要原因，RNA酶是一类生物活性非常稳定的酶，除细胞内RNA酶外，环境中的灰尘、各种实验器皿和试剂、人类皮肤的汗液、唾液中均存在RNA酶，且RNA酶耐热、耐酸碱，煮沸也不能使之完失活，蛋白变性剂可使之暂时失活，但变性剂去除后，又可恢复活性。所以在RNA提取过程中必须避免外源性RNA酶的污染和抑制内源性RNA酶的活性。

（1）去除外源性的RNA酶污染

实验过程必须戴手套操作，ALL溶液和水均需加0.1%的DEPC（焦碳酸二乙酯，是RNA酶的强抑制剂）室温搅拌过夜，然后高压处理，玻璃器皿洗净后在250摄氏度烘烤4小时。塑料器材好使用灭菌的一次性用品等。

（2）抑制内源性的RNA酶的活性

细胞破碎时，RNA酶释放出来，所以力争在RNA提取的初始阶段，通过加入RNA酶抑制剂来抑制内源性的RNA酶的活性。总之，RNA降解的原因很多，操作时一定要小心。

2.te殊组织价格另议，什么组织被你们公司认为是te殊组织？价格会比一般组织贵多少？

植物叶、花等te殊组织，具体价格请来电询价。

3.能否告知公司是用什么具体方法提取DNA或RNA的？

公司一般采取DNA或RNA抽提试剂盒来提取。

4.如果是抽提质粒，提出来的质粒纯度能达到转染级别吗？

我们抽提出来的质粒均进行纯化，质粒抽提分为小提、中提、大提三类，大提可以达到要求，具体看您需要做什么实验。

5.造成OD260 /OD280比值低有哪些原因？如何解决？

（1）蛋白质污染：确保不要吸入中间层及有机相。减少起始样品量，确保裂解完、彻底。加入氯仿后手先要使劲混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。解决办法是用氯仿重新抽提一次，再沉淀、溶解。（2）设备限制：测定OD260 及OD280 数值时，要使OD260 读数在0.10 -0.50之间。此范围线性好。（3）用水稀释样品：测OD 时，对照及样品稀释液请使用10 mM Tris（pH 7.5）。用水作为稀释液将导致比值的降低。

6.如何解决提取的RNA不溶现象？

（1）75%乙醇清洗沉淀后不要干燥时间过长或加热干燥。

（2）可以于60 ℃加热5 min后再于冰上溶解数小时。

（3）RNA沉淀中含有不溶的蛋白质混合物时，应注意吸取上清液时，不要让枪头接触蛋白层。

（4）溶解液更换为0.5%的SDS溶液（DEPC处理水配制）。

7.提取的RNA中含有DNA污染怎么解决？

(1) 裂解组织或细胞使用的变性剂量偏少，加大变性剂的用量。

(2) 使用的组织材料中含有大量的有机溶剂（如：乙醇、异丙醇等)、高浓度的Buffer、碱性溶剂等，在组织研磨中应尽量研磨仔细，直至研磨成粉末。

(3) 可以使用DNA酶消化处理去除DNA。

8.提取后的DNA或RNA以什么形式运输给我？RNA可以反转录成DNA吗？质量报告是什么形式的（OD值或者其他）？基因组完整性（如基因组片段基本无断裂）如何确保？

DNA以干粉的形式提供, RNA一般反转录为cDNA提供。质量报告以OD值+电泳图的形式提供。您可通过电泳图片来判定基因片段的完整性。

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