静态条件下细胞粘附力测量装置,WASH CHAMBER for Assaying Cell Adhesion under Static Conditions

型号:glycotech 31-006
联系人:李先生
联系电话:18618101725
品牌:glycotech

静态条件下细胞粘附力测量装置


由于在洗涤板时通常会产生不受控制的剪切力,因此在静态条件下使用方便的多孔板分析细胞与固定分子的粘附通常很困难。
洗涤室允许通过在充满液体的环境中倒置来洗涤多孔板的孔。 未结合的细胞通过重力与孔分离,从而消除了剪切力和粘附细胞通过液/气界面的通道。

已经描述了许多不同的分子来促进细胞粘附,包括几种细胞表面碳水化合物结合蛋白。由于清洗孔产生的剪切力,很难以方便的96孔微量滴定板形式测量细胞粘附。该协议引入了充满液体的洗涤室的使用,该洗涤室通过重力分离未结合的细胞,从而消除了不受控制的剪切力和粘附细胞通过液体/空气界面的通道。尽管可以使用其他方法(例如放射性标记),但细胞中装有荧光染料(6-羧基荧光素二乙酸酯)用于检测。该协议还可用于检测促进或抑制细胞粘附的分子。

材料:

  • 静态细胞粘附洗涤室
  • 测试悬浮细胞
  • 测试细胞粘附分子
  • 6-羧基荧光素二乙酸酯
  • 微量滴定板(96孔)
  • 自动96孔洗板机(可选)
  • 微量滴定板荧光板读取器
  • HEPES CaMg缓冲液:(0.05 M HEPES,0.15 M NaCl,1 mM CaCl2、1 mM MgCl2,pH 7.4)
  • 牛血清白蛋白(BSA)
  • RPMI 1640培养基
  • 微量滴定板荧光测量系统

 

协议:
1.通过将每个孔与200 ng细胞粘附分子在100 ?l HEPES CaMg缓冲液中孵育2小时,在96孔微量滴定板上涂上细胞粘附分子。在37°C下。

2.通过在HEPESCaMg /孔中加入100 ?l 2%BSA,进一步阻止与塑料孔的非te异性结合。在室温下孵育1小时。

3.用手或使用自动96孔板洗涤器用HEPESCaMg缓冲液洗涤微量滴定板。

4.用100 ?l含1%BSA的HEPESCaMg缓冲液填充孔,或在100 ?l含1%BSA的HEPESCaMg缓冲液中向每个孔添加细胞粘附的测试抑制剂,并孵育2小时。在室温下。

5.在孵育负荷测试细胞时,用6-乙酸二羧基荧光素(6-CFDA)进行如下测试:

A.用RPMI 1640洗涤细胞悬液

B.将细胞重悬于4.8 ml RPMI 1640中

C.加入200 ?l溶于RPMI 1640的1 mg / ml的6-CFDA溶液

D.在37°C下孵育30分钟。

E.用HEPESCaMg缓冲液洗涤细胞3次

F.将细胞浓度调整为2 x 106细胞/ ml。

6.向装有100 ?l HEPESCaMg的包被的孔中加入100 ?l装载6-CFDA的细胞(2 x 106细胞/ ml)。

7.在室温下孵育20分钟。

8.将微量滴定板放在装有HEPESCaMg缓冲液的静态细胞粘附洗涤室中,并关闭室,以消除任何空气接触和泄漏。

9.颠倒培养箱,让未结合的细胞从孔中脱落6分钟。在室温下。

10.将清洗室端部站立,取下带衬垫的顶部,并用镊子以15度角轻轻取下板,以确保液体残留在孔中。

11.使用微量滴定板读数器(例如,Perseptive tems,Inc.的Cytofluor 2350)测量荧光。




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