Western Blot服务-蛋白质免疫印迹技术服务

世联博研生命科学服务中心推出you势服务项目－Western Blot服务，该项服务可帮助客户解决自蛋白提取（表达）至蛋白检测的各种难题。质you价廉。

收费标准

以每张膜8个样本收费，不足8个样本的按8个样本收费。

注：（6个样品+阴性对照+阳性对照+marker+内参）/膜

服务范围

1.如客户提供组织或细胞样本，我们会根据样本的特点，选择适当的蛋白提取方法提取蛋白，并检测好蛋白浓度。

2.如客户需要重组蛋白，我们会根据客户具体的要求构建表达载体，选择合适的表达和纯化系统为客户制备重组蛋白（具体参见载体构建服务）。

服务周期

1. 1~2个星期，具体视样品数量而定。

2.如客户需表达重组蛋白，服务周期根据其蛋白表达纯化的具体情况而定，请来电咨询。

客户须知（对材料的要求、注意事项）

1.客户须在实验开始前确保其提供材料的数量和质量，并提供相关信息
A.客户需提供尽量多的样品（组织：250~500mg或细胞：1×106- 107/样本）；
B.客户提供有效的一抗，一抗自备或代购；
C.客户提供检测目的蛋白的详细资料；
D.客户要确保抗体的有效性及模型建造的成功性。

2.本公司在收到客户提供的研究材料后的弟二个工作日起开始实验。

服务程序

1.可在我公司网站内直接填写《Western Blot服务订单》发至我公司邮箱。

2.可下载订单，填写完成后，用传真的形式发到我公司。

3.可电话联系详谈有关具体要求和服务内容。

4.签订《Western Blot服务合同》，预付实验总费用的50%作为实验预付款。

5.寄送：委托单位的试验材料和试剂等均须采用te快专递形式邮寄，有低温要求的、固定要求的，按低温保存、固定防碎方法运输

,以确保实验物品的安可靠。

6.实验结束后，本公司将结果及时发给客户，同时根据客户要求处理相关材料

A.实验结果图；

B.详细的实验步骤和相关数据；

C.完整的实验报告。

7.客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

服务咨询及技术支持

·电话:

·Email:SLBY800@163.COM

服务项目简介

Western blot技术是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳后，经PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载

体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对

应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的弟二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的te异性目的基因表达

的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

应用领域

·可以非常有效的鉴定某一蛋白质（或表位）的性质；

·结合免疫沉淀法，可以用来定量分析小分子抗原；

·表位作图；

·结构域分析；

·斑点印迹，可用层析组分，蔗糖梯度或脉冲追踪实验分析；

·功能实验中蛋白质复性；

·配基结合，免疫印迹后多种配基可同蛋白质进行配基结合试验；

·抗体纯化；

·由膜上收获蛋白质条带制备抗体；

·氨基酸组成分析和序列分析，微量蛋白质（10 pmol）转移到PVDF膜上或可进行氨基酸组成分析和序列分析。

转移的蛋白质或多肽条带可经考马斯亮蓝染色后切下进行氨基酸组成分析或序列分析。

技术步骤

1.蛋白质抽提

2.蛋白质定量

3.变性聚丙烯酰胺电泳（SDS-PAGE）

4.蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜

5.膜的封闭和抗体的孵育

6.结果检测

7.数据分析

8.提供实验报告

FAQ（Frequently Asked Questions）

1.做组织样品的western blot的时候，处理样品有什么诀窍？

必须进行研磨、匀浆、超声处理，蛋白质溶解度会更好，离心要充分，膜蛋白需用更剧烈的方法抽提，低丰度膜蛋白可能还要分步

抽提(超速离心)。还有一点就是组织中的蛋白酶活性更强，需要注意抑制蛋白酶的活性（加入PMSF和蛋白酶抑制剂cocktail），封

闭剂一般5%脱脂奶粉。如果一抗为多克隆抗体，使用BSA也是不错的选择。

2.免疫组化和Western blot可以用同一种抗体吗？

免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇（又称表位），有些表位是线性的，而有的属于构象型；线性表位不受蛋白变

性的影响，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；构象型表位由于受蛋白空间结构限制，煮后变性会消失。如果你所用的抗体识别的是蛋

白上连续的几个氨基酸，也就是线性表位，那么这种抗体可同时用于免疫组化和Western blotting，而如果抗体识别构象形表位，

则只能用于免疫组化。一般抗体说明书上都有注明此种抗体识别的氨基酸区间。（限于单抗）

3.提供的蛋白样品是否需浓缩、纯化？如何浓缩、纯化上清液中的目的蛋白？

按照提供的浓度，如果做Western blot，是不用浓缩样品的。

4.对小分子蛋白Western blot时需te别注意哪些条件？

对于20kd的小分子的蛋白，Western Blot中要注意的是：

1、转移时的时间

2、转移时的电流或电压

3、transfer buffer 中加20%的甲醇

4、可以用13-15%的分离胶

5.如果我提供组织或细胞，公司提取蛋白跑胶后，剩下的样品蛋白裂解液可以给我一份吗？

可以。

6.显影结果是否有原始胶片可以提供？

根据不同的显影方式来判断是否提供。