随机扩增多态性DNA(RAPD)服务

世联博研生命科研服务中心提供随机扩增多态性DNA(RAPD)服务。运用随机引物扩增寻找多态性DNA片段可作为分子标记。这种方法即为

RAPD(Random amplified polymorphic DNA，随机扩增的多态性DNA)。尽管RAPD技术诞生的时间很短，但由于其te的检测DNA多

态性的方式以及快速、简便的特点，使这个技术已渗透于基因组研究的各个方面。

收费标准

DNA提取：60/样品

随机引物合成：<100条 12元/条；100-500条 9元/条；501-1000条 7元/条；>1000条 5元/条

RAPD： <8个样 100元/样；8-50个样 80元/样；>50个样 询价

服务周期

我公司在接受实验委托1~2周内完成实验并交付实验报告。

客户须知（对材料的要求、注意事项）

服务程序

1. 可在我公司网站内直接填写《随机扩增多态性DNA服务订单》发至我公司邮箱。

2. 可下载订单，填写完成后，用传真的形式发到我公司。

3. 可电话联系详谈有关具体要求和服务内容。

4. 签订《随机扩增多态性DNA服务合同》，预付实验总费用的50%作为实验预付款。

5. 寄送：委托单位的试验材料和试剂等均须采用te快专递形式邮寄，有低温要求的、固定要求的，按低温保存、固定防碎方法运输，以确保实验物品的安可靠。

6. 实验结束后，本公司将结果及时发给客户，同时根据客户要求处理相关材料：

7. 客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

服务咨询及技术支持

·电话:

·Email:SLBY800@163.COM

服务项目简介

RAPD技术建立于PCR技术基础上，它是利用一系列(通常数百个)不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链(通常为十聚体)为引物，

对所研究基因组DNA进行PCR扩增聚丙烯酰胺或琼脂糖电泳分离，经染色或放射性自显影来检测扩增产物DNA片段的多态性。

这些扩增产物DNA片段的多态性反映了基因组相应区域的DNA多态性。RAPD所用的一系列引物DNA序列各不相同，

但对于任一te异的引物，它同基因组DNA序列有其te异的结合位点，这些te异的结合位点在基因组某些区域内的

分布如符合PCR扩增反应的条件，即引物在模板的两条链上有互补位置，且引物3'端相距在一定的长度范围之内，

就可扩增出DNA片段。因此如果基因组在这些区域发生DNA片段插入、缺失或碱基突变就可能导致这些te定结合位点

分布发生相应的变化，而使PCR产物增加、缺少或发生分子量的改变。通过对PCR产物检测即可检出基因组DNA的多态性。

分析时可用的引物数很大，虽然对每一个引物而言其检测基因组DNA多态性的区域是有限的，但是利用一系列引物则可

以使检测区域几乎覆盖整个基因组。因此RAPD可以对整个基因组DNA进行多态性检测。另外

，RAPD片段克隆后可作为RFLP的分子标记进行作图分析。

该技术具有以下的you越性：所需DNA 样品少，但对纯度要求很高；能直接对基因组进行检测；

不需要先预设计探针和对基因组进行测序；不需要Southern 杂交、银染等复杂步骤；操作安；

不需用同位素示踪；对人一般不构成危害。

技术步骤

一、 材料

不同来源的DNA(50 ng/ul)。

二、设备

PCR仪，PCR管或硅化的0.2 ml eppendorf管，电泳装置。

三、试剂

1、随机引物(10 mer) (5 μmol/L)

2、Taq酶

3、10xPCR 缓冲液

4、MgCl2：25 mmol/L

5、dNTP：每种2.5 mmol/L

四、操作步骤：

1. 在25 μl反应体系中,加入

模板DNA 1 μl (50 ng)

随机引物 1 μl (约5 pmol)

10×PCR Buffer 2.5 μl

MgCl2 2 μl

dNTP 2 μl

Taq酶 1单位（U）

加ddH2O 至 25 μl

混匀稍离心，加一滴矿物油。

2. 在加热至90℃以上的PCR仪中预变性94 ℃ 2分钟, 然后循环: 94 ℃ 1分钟，36 ℃ 1分钟，72 ℃ 1分钟，共40轮循环。

3. 循环结束后, 72 ℃ 10分钟，4℃保存。

4. 取PCR产物15 μl加3 μl上样缓冲液(6×)于2% 琼脂糖胶上电泳, 稳压50~100 Ｖ（电压低带型整齐，分辨率高）。

5. 电泳结束，观察、拍照。

FAQ（Frequently Asked Questions）

1. 随机引物的长度一般是多少？

随机引物一般是8-10碱基的寡核苷酸引物。

2. 如何选择随机引物？

可以查询相关文献，看看文献报道采用的是什么引物，一般来说，合适的引物都是通过大量筛选得到的。随机引物的筛选要遵守以下原则：

（1）产物的DNA条带清晰可见；

（2）在分析的样品之间存在有较高的多态性；

（3）产生多态性DNA条带具有可重复性。

3. 贵公司说随机扩增多态性DNA对DNA的纯度要求很高，DNA的纯度一般要达到什么水平？

一般测OD值，若A260/A230>=2.0; A260/A280>=1.8 即表明纯度达到要求。

4. RAPD与PCR技术相比的you缺点？

①不使用同位素，减少了对工作人员健康的危害；

②可以在物种没有任何分子生物学研究的情况下分析其DNA多态性；

③对模板DNA的纯度要求不高；

④技术简单，无需克隆DNA探针，无需进行分子杂交；

⑤灵敏度高，可提供丰富的多态性；

⑥RAPD引物没有严格的种属界限，同一套引物可以应用于任何一种生物的研究，因而具有广泛性、通用性。

但是，RAPD技术较易受到各种因素的影响。无论是模板的质量和浓度，短的引物序列，PCR的循环次数，基因组DNA的复杂性，技术

设备等，都有可能是RAPD技术重复性差的直接原因。目前，多从以下几个方面来提高反应的稳定性：

①操作规范，反应体系的组成要力求一致，尽可能地使RAPD反应标准化；

②提高扩增片段的分辨率；

③将RAPD标记转化为SCAR标记后再进行常规的PCR分析，可以提高反应的稳定性及可靠性。

5. RAPD主要运用在哪些方面？

目前，RAPD标记已被广泛应用于分子生药学各方面：

①生物多样性：随着植物药研究的不断深入，可持续开发利用药用植物资源的问题越来越受到重视。应用RAPD技术进行药用植物生

物多样性研究，可以在遗传多样性水平上了解天然产物多样性与物种、生态及地理分布的关系，挖掘潜在的药物资源，为开发新药

寻找途径。RAPD方法可以检测物种的遗传多样性，探讨物种的亲缘关系和进化趋势。因此它是药用植物资源保护和种质资源保存的

依据，te别是对濒危物种的研究更具有实际意义。

②RAPD标记可用于生药分类，在DNA分子水平上鉴别生物不同种、亚种、变种甚至株。

③RAPD标记可用来制作生物类生药系统发育关系上的树状图，te别是种内水平。这为生药亲缘进化关系,寻找新的药用资源开辟了新途径。

④RAPD标记可用于构建基因图谱，进行基因定位，和对未知序列的DNA片段扩增与测序。

⑤RAPD标记亦可用于遗传连锁图谱的构建，指导药用植物育种，防止品种间杂化和自交，选育you良性状的品种。