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流式细胞术检测服务(FACS)
流式细胞术检测（FACS）服务
世联博研生命科学服务中心提供流式细胞术检测（FACS）服务。流式细胞术（flow cytometry, FCM)是一种可以对细胞或亚细胞结构进行快速测量的新型分析技术和分选技术。其特点是①测量速度快；②可进行多参数测量；③是一门综合性的高科技方法（ 流式细胞术综合了光学，电子学，流体力学，细胞化学，免疫学，激光和计算机等多门学科和技术）；④既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。
服务内容
(1)细胞周期细胞；(2)细胞凋亡；(3)免疫细胞分型；(4)表面抗原鉴定；(5)细胞内钙离子检测；(6)线粒体功能；(7)细胞分选。
服务价格及周期
服务项目 |
样品处理 |
应用的试剂 |
收费 |
细胞周期 |
细胞——胰酶消化——PBS洗——70%乙醇4℃固定过夜 （不超过一周） |
RNA酶，PI染料 |
<10个样品，80元/个 >10个样品，60元/个 试剂费已包括。 |
细胞凋亡 |
新鲜培养的细胞 |
Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒 |
<10个样品，150元/样品 >10个样品，120元/样品 已包括试剂费用，客户提供试剂可减20元，另需细胞培养费用。 |
免疫细胞分型 |
培养的细胞：如白血病细胞，客户刺激好的细胞、抗凝血、脾匀浆 |
破膜剂，固定剂，刺激剂、te异性抗体（需客户提供） |
双染： <10个样品，120元/样品 >10个样品，100元/样品 三染：在原来基础上加30元 需要分离细胞、培养、刺激的具体情况另记 |
表面抗原鉴定 |
培养的细胞 |
te异性抗体（需客户提供） |
单染： <10个样品，80元/样品 >10个样品，60元/样品 双染：在原来基础上加30元 三染：在原来基础上加30元 |
细胞内钙离子检测 |
培养的细胞 |
Fluo-3 AM(钙离子荧光探针) |
<10个样品，100元/样 >10个样品，80元/样品（已包含试剂） |
线粒体功能 |
仅适用于悬浮或贴壁培养的新鲜细胞 |
客户提供试剂盒 |
检测费可同细胞周期 |
细胞分选 |
收费：标记费用+分选仪使用费用价格体系类似于共聚焦 |
我公司在正式接受实验委托1~2周左右交付实验结果。所提供的实验结果忠实于样本的实际情况。
客户须知
1、细胞数量达到检测所需（细胞周期1x106、细胞凋亡3x106），生长良好，无污染，附有细胞生长照片，注明实验检测项目所需试剂盒。
2、外周血：EDTA或肝素抗凝血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。
3、试剂：部分常用荧光探针，如PI等，我公司可免费提供；te殊标记物，如CD抗体等，用户须另行购买，我公司可以代购；用户所提供抗体应可与样本发生te异性识别反应。
4、样品包装要求：细胞培养在培养瓶中或操作前样本于合适的条件保存。
服务程序
1. 可在我公司网站内直接填写《流式细胞术检测（FACS）服务订单》发至我公司邮箱。
2. 可下载订单，填写完成后，用传真的形式发到我公司。
3. 可电话联系详谈有关具体要求和服务内容。
4. 签订《流式细胞术检测（FACS）服务合同》，预付实验总费用的50%作为实验预付款。
5. 寄送：委托单位的试验材料和试剂等均须采用te快专递形式邮寄，有低温要求的、固定要求的，按低温保存、固定防碎方法运输，以确保实验物品的安可靠。
6. 实验结束后，本公司将以下结果及时发给客户，同时根据客户要求处理相关材料：
·实验方法、步骤、所用试剂、仪器等。
·流式实验数据。
7. 客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
·电话:
·Email:SLBY800@163.COM
附：流式细胞术检测样品制备方法：
A. 直接标记抗体（FITC标记抗体）：
(1) 收集1×106个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2ml PBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS ,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定，待测即可。
(4) 用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
B. 未标记抗体间接免疫荧光标记法：
（1）收集2×106个细胞，用冷的PBS 2ml 洗涤细胞一次，800rpm离心5min。
（2）用2ml 4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min；2ml PBS重悬细胞，800rpm离心5min；
（3）用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞，冰上放置10min,800rpm离心5min。
（4）加入饱和剂量未标记抗体，冰上放置40min,800rpm离心5min，用2ml冷的PBS 重悬细胞，800rpm离心5min，洗去未结合一抗，重复一次。
（5）加入荧光标记（FITC）标记的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm离心5min，去上清，PBS洗涤两次。
（6）加入0.5ml 1%多聚甲醛重悬细胞；固定待测。
（7）流式细胞仪检测荧光值,每管计数10 000个细胞。
C.细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品（PI染色）的制备：
（1）待测样本制成单细胞悬液，然后200g离心5分钟，弃上清。
（2）用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小时。
（3）调整细胞浓度为106细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。
（4）PI染液终浓度为50微克/毫升，RNase A终浓度为20微克/毫升。
注：本方法仅供参考，如有其它要求，请在送样前说明。
技术步骤
① 样品制备：培养细胞或新鲜组织制成单细胞悬液
② 荧光标记：直接或间接标记
③ 上机检测
应用实例：
① 直接标记抗体（FITC标记抗体）
② 未标记抗体间接免疫荧光标记
③ 细胞周期，细胞凋亡及DNA多倍体分析（PI染色）
应用领域
① 细胞表面标志的检测
② 细胞内和体液中细胞因子的测定
③ DNA含量及DNA倍体分析
④ 细胞凋亡分析
FAQ（Frequently Asked Questions）
1. 可否由我提供细胞和处理的药物，你们按照我的要求处理后直接做流式？价格怎么算？
可以.价格另计.具体参看是何种实验.具体请来电咨询.
2. 我有31个样品细胞周期的9个,免疫细胞分型双染的8个,三染的14个,能否给点you惠.
按各个不同实验的价格算,但可以在总价上给部分you惠(来电询问).
3. 请问贵公司FACS流式检测采用的是什么仪器？
BD流式仪
4. 流式检测送检样品有什么要求？
各个实验有不同的要求,请来电询问.
5. 实验结果，如图片，能够符合高水平杂志发表文章的要求吗？如果达不到怎么办？
本公司只提供原始数据,配套仪器及软件所呈现出来的图片,如需数据分析,价格另计.
实时荧光定量PCR技术服务:自己设计方案,我们设计的方案中间可能会有问题,
6. 你们公司采用的是什么仪器，如何确保实验结果的稳定与可靠性。
ABI 7300
我们的实验都是由专业技术人员操作,基本可以排除人员因素; 实验前需要测验样品,如样品不达标,则无法进行该实验.
7. 探针法和染料法有什么区别吗，哪种方法的定量效果更好？
探针法,探针是te异性的,染料无te异性.
8. 绝对定量与相对定量有什么区别，一般发表的论文用的是什么定量方法？
相对定量的结果只是给出一个大致的数量比;而绝对定量的结果呈现的是一个具体的数量值.一般论文采用相对定量方法.
9. 是否有REAL-TIME PCR引物合成服务，客户需要提供哪些信息？
1）生物种 (Human、Mouse、Rat、Cow、Dog、Chicken)。
2）目的基因信息 (GenBank Acc、Gene ID、关键词)。
