单链构象多态性分析服务 (PCR-SSCP)

单链构象多态性分析服务 (PCR-SSCP)

世联博研生命科学服务中心提供单链构象多态性分析服务(PCR-SSCP)。PCR-SSCP分析技术是一种DNA单链凝胶电泳技术，它根据形成不

同构象的等长DNA单链在中性聚丙烯酰胺凝胶中的电泳迁移率变化来检测基因变异。该技术已被广泛用于癌基因和抗癌基因变异的检

测、遗传病的致病基因分析以及基因诊断、基因制图等领域。世联博研生命科学服务中心将会为您在单链构象多态性分析服务方面提供方位，性价

比高的解决方案。

收费标准

详情请来电咨询

服务周期

我公司在接受实验委托1~2周内完成实验并交付实验报告。

客户须知（对材料的要求、注意事项）

• 客户提供靶DNA，请提供DNA样品电泳图，并保证DNA样品的有效性；客户也可以提供含靶DNA的组织或细胞，需提供足量的新鲜样品（DNA提取费用另计）。
• 核酸片段的大小: 用于SSCP分析的核酸片段越小，检测的敏感性越高。对于<200 bp的片段，SSCP可发现其中70％的变异；对于300 bp左右的片段则只能发现其中50％的变异；而＞500 bp的片段，则仅能检出10％~30％的变异，因此，<300bp，尤其是150 bp左右的核酸片段更适于SSCP分析。对于大于400bp的PCR产物就需要设法进一步处理，可以用限制性酶消化PCR产物，产生小于400 bp的DNA片段，再进行SSCP分析。
• 游离引物: 游离引物可能同PCR产物结合而改变其泳动率，即使游离引物量为6 nM都有明显影响。因此，应尽可能除去游离引物。

  可以采用不对称引物扩增方法，尽可能消耗多余的引物。也可以运用过柱或磁性球方法纯化PCR产物。

  或者是稀释PCR产物，减少游离引物的干扰。

• 假阴性: 一般认为，如没有污染，PCR－SSCP分析不存在假阳性结果，但可能出现假阴性结果，

  后者是由于点突变引起的空间构象变化甚微，迁移率相差无几所致，尤其是点突变发生在扩增片段的两端时。

  如果有阳性和阴性对照，结果可以重复确定的突变带是可信的，如果没有阳性对照，应经测序来确定其是否为突变带。

  由于PCR－SSCP的不足之处主要是可能检出假阴性结果。应通过设置阳性对照，摸索电泳条件，假阴性结果在很大程度上是

  可以避免的。但对未知基因变异的检测，假阴性结果则难以完消除。

服务程序

1.可在我公司网站内直接填写《单链构象多态性服务订单》发至我公司邮箱。

2.可下载订单，填写完成后，用传真的形式发到我公司。

3.可电话联系详谈有关具体要求和服务内容。

4. 签订《单链构象多态性服务合同》，预付实验总费用的50%作为实验预付款。

5. 寄送：委托单位的试验材料和试剂等均须采用te快专递形式邮寄，有低温要求的、固定要求的，按低温保存、固定防碎方法运输，以确保实验物品的安可靠。

6. 实验结束后，本公司将结果及时发给客户，同时根据客户要求处理相关材料：

• 具体实验方法、步骤、所用试剂、仪器，电泳图片以及相关分析数据等，实验结果将以电子或书面形式提交给您。

7. 客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

服务咨询及技术支持

·电话:

·Email:SLBY800@163.COM

服务项目简介

单链DNA段呈复杂的空间折叠构象，这种立体结构主要是由其内部碱基配对等分子内相互作用力来维持的，当有一个碱基发生改变时

，会影响其空间构象，使构象发生改变。空间构象有差异的单链DNA分子在聚丙烯酰胺凝胶中受排阻程度不同，因此，通过非变性聚

丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，可以非常敏锐地将构象上有差异的分子分离开。该方法即为单链构象多态性(Single-Strand

Conformation Polymorphism，SSCP)分析。PCR-SSCP分析的基本程序为：手先PCR扩增te定靶序列，然后将扩增产物变性为单链

，进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。

技术步骤

1.PCR扩增靶DNA;

2.将te异的PCR扩增产物变性，而后快速复性，使之成为具有一定空间结构的单链DNA分子;

3.将适量的单链DNA进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳;

4.后通过放射性自显影、银染或溴化乙锭显色分析结果。若发现单链DNA带迁移率与正常对照的相比发生改变，就可以判定该链构

象发生改变，进而推断该DNA段中有碱基突变。

应用领域

广泛用于癌基因和抗癌基因变异的检测、遗传病的致病基因分析以及基因诊断、基因制图等领域。

应用实例

FAQ（Frequently Asked Questions）

1. 单链构象多态性分析有什么作用？

广泛用于癌基因和抗癌基因变异的检测、遗传病的致病基因分析以及基因诊断、基因制图等领域。

2. 在单链构象多态性实验中，如何设置阳性对照，如果不存在阳性对照，实验结果可信吗？

实验阴性对照一般选用正常细胞或菌株DNA的PCR扩增条带，而阳性对照则是采用已知突变的正常细胞或菌株，如果不存在阳性对照，一般会应用测序来确定其是否为突变带。