限制性片段长度多态性服务(RFLP)

限制性片段长度多态性分析服务

世联博研生命科研服务中心提供限制性片段长度多态性分析服务。RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism，限制性片段

长度多态性)已被广泛用于基因组遗传图谱构建、基因定位以及生物进化和分类的研究。RFLP是根据不同品种或个体基因组的限制性

内切酶的酶切位点碱基发生突变，或酶切位点之间发生了碱基的插入、缺失，导致酶切片段大小发生了变化，这种变化可以通过te

定探针杂交进行检测，从而可比较不同品种或个体的DNA水平的差异（即多态性）。世联博研生命科研服务中心将会为您在限制性片段长度多态性分析

服务方面提供方位，性价比高的解决方案。

收费标准

服务周期

我公司在接受实验委托1~2周内完成实验并交付实验报告，具体视样品量而定。

客户须知（对材料的要求、注意事项）

样品要求：血液样品，样品为EDTA抗凝或枸橼酸钠抗凝，样品量大于0.1 ml，样品采集后-20或-80 ℃保存。组织样品，样品可以

为新鲜组织（好－80℃保存）或石蜡包埋的组织，也可以是95%乙醇中固定的组织，组织量大于50 mg。样品也可以是细胞、菌液

或其它。此外，客户还需提供待测定的基因名称、序列或Gene bank ID。

服务程序

1. 可在我公司网站内直接填写《限制性片段长度多态性分析服务订单》发至我公司邮箱。《限制性片段长度多态性分析服务订单》下载

2. 可下载订单，填写完成后，用传真的形式发到我公司。

3. 可电话联系详谈有关具体要求和服务内容。

4. 签订《限制性片段长度多态性分析服务合同》，预付实验总费用的50%作为实验预付款。《限制性片段长度多态性分析服务合同》下载

5. 寄送：委托单位的试验材料和试剂等均须采用te快专递形式邮寄，有低温要求的、固定要求的，按低温保存、固定防碎方法运输

，以确保实验物品的安可靠。

6. 实验结束后，本公司将结果及时发给客户，同时根据客户要求处理相关材料：
DNA电泳图片；

探针及Southern杂交图片；

具体实验方法、步骤、所用试剂、仪器，及相关分析数据等，实验结果将以电子或书面形式提交给您。

7. 客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

服务咨询及技术支持

电话:
Email:

服务项目简介

DNA分子水平上的多态性检测技术是进行基因组研究的基础。RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism，限制性片段长

度多态性)已被广泛用于基因组遗传图谱构建、基因定位以及生物进化和分类的研究。RFLP是根据不同品种或个体基因组的限制性内

切酶的酶切位点碱基发生突变，或酶切位点之间发生了碱基的插入、缺失，导致酶切片段大小发生了变化，这种变化可以通过te定

探针杂交进行检测，从而可比较不同品种或个体的DNA水平的差异（即多态性）。

所用的探针为来源于同种或不同种基因组DNA的克隆，位于染色体的不同位点，从而可以作为一种分子标记，构建分子图谱。当某个

性状与某个分子标记协同分离时，表明这个性状与分子标记连锁。分子标记与性状之间交换值的大小，即表示目标基因与分子标记

之间的距离，从而可将基因定位于分子图谱上。不同限制性内切酶切割基因组DNA后，所切的片段类型不一样，因此，限制性内切酶

与分子标记组成不同组合进行研究。常用的限制性内切酶一般是Hind III，BamH I，EcoR I，EcoR V，Xba I，而分子标记则有几

个甚至上千个。

参考技术步骤

1. 基因组DNA的酶解

（1）大片断DNA的提取详见基因组DNA提取实验，要求提取的DNA分子量大于50 kb，没有降解。

（2）在50 μl反应体系中，进行酶切反应:

5 μg基因组DNA

5 μl 10×酶切缓冲液

20单位（U）限制酶

加ddH2O, 至50 μl

(3) 轻微振荡，离心，37 ℃反应过夜。

(4) 取5 μl反应液，0.8％琼脂糖电泳观察酶切是否彻底，这时不应有大于30 kb的明显亮带出现。

[注意] 未酶切的DNA要防止发生降解，酶切反应一定要彻底。

2. Southern转移

（1） 酶解的DNA经0.8％琼脂糖凝胶电泳(可18 V过夜)后EB染色观察。

　　
（2） 将凝胶块浸没于0.25 mol/L HCl中脱嘌呤，10分钟。 　　

（3） 取出胶块, 蒸馏水漂洗, 转至变性液变性45分钟。经蒸馏水漂洗后转至中和液中和30分钟。

（4） 预先将尼龙膜和滤纸浸入水中，再浸入10×SSC中,将一玻璃板架于盆中铺一层滤纸(桥)然后将胶块反转放置，盖上尼龙膜，

上覆二层滤纸，再加盖吸水纸，压上半公斤重物, 以10×SSC盐溶液吸印，维持18-24小时。也可用电转移或真空转移。

（5） 取下尼龙膜，0.4 mol/L NaOH 30秒, 迅速转至0.2 mol/L TrisHCl，pH7.5/2×SSC溶液中，5分钟。

（6） 将膜夹于2层滤纸内，80℃真空干燥2小时。

（7） 探针的制备和杂交。

[注意]

a. 步骤（2）中脱嘌呤时间不能过长。

b .除步骤（1）、（4）、（5）外, 其余均在摇床上进行操作。

c. 步骤（4）中，当尼龙膜覆于胶上时，绝对防止胶与膜之间有气泡发生。

d. 有时用一种限制性内切酶不能发现RFLP的差异，这时应该试用另一种酶。