糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病的严重并发症之一，也是导致终末期肾病（ESRD）最常见的原因。外泌体（exosomes）是由膜衍生而来的纳米级囊泡，已被证实可由多种细胞分泌，通过将其携带的蛋白质、脂质、RNA转入受体细胞而成为细胞间的交流信使。多个研究证明，外泌体在DN的发生发展中发挥着重要作用。DN患者肾小管功能障碍往往出现较早，其程度与血糖水平直接相关。

为了探讨高糖环境下肾小管上皮细胞来源外泌体诱导巨噬细胞激活的作用与机制，安徽医科大学第一附属医院王东等使用下列实验方法：正常糖（5.5 mmol/L）及高糖（30.0 mmol/L）分别处理人肾小管上皮细胞（HK2）48 h，收集两组上清液，使用超速离心法提取外泌体，采用透射电镜、Western印迹鉴定外泌体。两组外泌体以PKH67标记后分别刺激人急性单核细胞白血病细胞株（THP-1）诱导分化的巨噬细胞，激光共聚焦观察THP-1巨噬细胞是否吞噬外泌体；显微镜下观察THP-1巨噬细胞的形态；Transwell小室法检测THP-1巨噬细胞的趋化能力；实时荧光定量PCR与酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测THP-1巨噬细胞的诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1/CCL2）水平；Western印迹检测各组p-JNK、p-p38MAPK和NF-κB p65蛋白的水平。

结果发现，上清液经超速离心获取的囊泡，在电镜下观察到外泌体，粒径30~100 nm。Western印迹检测囊泡表达外泌体的标志蛋白CD63和TSG101，不表达Calnexin蛋白，提示所获取外泌体的纯度较高。（2）激光共聚焦证实各组外泌体均能被THP-1巨噬细胞吞噬。与正常糖外泌体刺激组相比，高糖外泌体刺激组的THP-1巨噬细胞趋化能力增强，iNOS、TNF-α、IL-1β、MCP-1的表达和分泌水平均上调（均P<0.01），p-JNK、p-p38 MAPK和NF-κB p65蛋白水平也显着升高（均P<0.01）。

研究表明，高糖环境下肾小管上皮细胞分泌的外泌体可通过MAPK/NF-κB信号通路诱导巨噬细胞的激活和功能改变。(生物谷Bioon.com）

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