酵母双杂交系统服务 yeast two-hybrid system

酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system)的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转

录激活因子的参与。反式转录激活因子，例如酵母转录因子 GAL4在结构上是组件式的（modular），往往由两个或两个以上结构上

可以分开，功能上相互立的结构域（domain）构成，其中有DNA结合功能域(DNA binding domain, DNA-BD)和转录激活结构域（

activation domain，DNA-AD）。这两个结合域将它们分开时仍分别具有功能，但不能激活转录，只有当被分开的两者通过适当的

途径在空间上较为接近时，才能重新呈现完整的GAL4转录因子活性，并可激活上游激活序列（upstream activating sequence,

UAS）的下游启动子，使启动子下游基因得到转录。

在酵母双杂交系统中，“诱饵”蛋白X克隆至DNA-BD载体中，表达DNA-BD/X融合蛋白；待测试蛋白Y克隆至AD载体中，表达AD/Y融合

蛋白。一旦X与Y蛋白间有相互作用，则DNA-BD和AD也随之被牵拉靠近，恢复行使功能，激活报告重组体中LacZ和HIS3基因的表达。

技术步骤

（1）将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；

（2）将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；

（3）再将文库质粒转化到酵母中；

（4）通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白。

应用领域

（1）利用酵母双杂交发现新的蛋白质和蛋白质的新功能；

（2）利用酵母双杂交在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用；

（3）利用酵母双杂交筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间相互作用的影响

服务周期

1) 酵母双杂交建库

为客户构建指定的酵母双杂交基因文库。由客户提供cDNA 或组织、细胞。

技术服务内容包括：总RNA提取、纯化，mRNA分离，cDNA制备，cDNA连接AD载体，连接产物转化大肠杆菌，cDNA文库效价测定，

cDNA文库扩增等内容。

服务完成时提供两种形式的文库：(1)该文库转化的大肠杆菌甘油冻存管；(2)从该文库扩增的DNA。

周期：2~3个月。

2) 酵母双杂交文库筛选

为客户对指定的基因文库进行酵母双杂交筛选。由客户提供诱饵基因和基因文库。

周期：3个月。筛选完成后向客户提供详细的筛选报告和阳性克隆实物。

3) 为客户对指定的2个或多个基因之间进行酵母双杂交实验。由客户提供基因克隆

周期：1个月。实验完成后向客户提供详细的实验报告和相互作用阳性的酵母共转化菌株。

服务咨询及技术支持

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