产品名称:细胞核压痕用于悬浮和限制干细胞的力转导研究
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以下图像和视频由 Verena Ruprecht 博士(基因组调控中心,CRG)、Stefan Wieser 博士和Michael Krieg 博士(光子科学研究所,ICFO)的实验室提供。这些实验室合作开展了一项工作,其中使用斑马鱼胚胎的细胞提取物作为生物样本,使用SENSOCELL 光镊 在悬浮或密闭条件下压痕干细胞核。这个例子取自这些作者在《科学》杂志上发表的一篇作品,该作品涉及细胞核力转导途径在控制细胞变形行为和细胞迁移可塑性方面的作用。

新的!使用光镊直接测量约束中亚细胞力学的视频协议

在这里,作者提出了一个协议,通过光学陷阱直接测量力来研究三维限制中分离的胚胎斑马鱼细胞的细胞内机械特性。

简介 / 单细胞制备和染色 / 光捕获 (OT) 室间距和光镊启动 / 光学力传感器的对准 / 执行细胞核压痕实验 / 结果:内部细胞核的力和材料特性的测量斑马鱼胚胎/结论。

?细胞核压痕实验

为了进行实验,作者使用 SENSOCELL 光镊来光学捕获和操纵 1 μm 荧光珠,以压印从斑马鱼胚胎中提取的干细胞的细胞核。这些珠子之前已被内化到 1 细胞早期胚胎中。编程了应力松弛程序来进行实验,包括预先定义捕获的微球的自动运动。在此设置中,SENSOCELL 光镊平台与转盘共焦装置相结合,从而可以在实验过程中对拉伸的细胞核进行实时荧光成像。

图 1左:实验草图:注射的微球被光学捕获以压印来自斑马鱼胚胎的悬浮细胞和限制细胞的细胞核。右图:使用SENSOCELL光镊系统进行的细胞核压痕实验。捕获的微球被推向细胞核(蓝色),并在几秒钟后移开。测量过程中,电池(绿色)在下侧出现气泡。

光阱时间-位置和时间-力曲线

在启动应力松弛程序之前,光学捕获的珠子距离核膜几微米。当程序启动时,光阱以一定的速度向细胞核移动,直到到达细胞核膜,压痕过程开始。此时,光学捕获力从零开始增加并产生力峰值。压痕深度取决于预定义的光陷阱轨迹。在这种情况下,程序的编程方式是使光阱保持压痕细胞核 10 秒。在这 10 秒内,观察到力的松弛。之后,光阱返回到其原始位置,记录的力降至零。下图显示了单细胞核压痕实验的光阱时间-位置和时间-力曲线。